الصفحة الرئيسية > أخبار > المحتوى

التخطيط الشامل لمختبرات تنقية PCR

Jul 22, 2020

13- ومن أجل منع التلوث المتبادل أثناء التشغيل، فإن المتطلبات الرئيسية لتصميمه وبنائه وإدارته ما يلي:


1. يجب أن تصميم المختبرات والبناء، ونظام العمل الآمن أو إجراءات التشغيل القياسية للسلامة تلبية متطلبات الحالية "المتطلبات العامة للسلامة البيولوجية المختبرية" GB19489.


2- وينقسم نظام PCR إلى أربعة مجالات وظيفية وفقاً لخطوات العمل، وهي مجال تخزين المكبير وإعداده، ومنطقة إعداد العينات، ومنطقة التضخيم، ومجال تحليل منتجات التضخيم. وإذا تم تجهيز جهاز من أجهزة PCR الفلورسنت في الوقت الحقيقي، يمكن الجمع بين مجالي التضخيم وتحليل المنتج. ويجب وضع علامات واضحة على كل مجال وظيفي، ويجب ألا تكون المعدات والمواد في مختلف المجالات الوظيفية مختلطة.


ويمكن تنفيذ اتجاه تدفق الهواء من مختبر PCR وفقا لتخزين الكاشف ومنطقة إعداد→منطقة إعداد العينة→ منطقة تضخيم منطقة تحليل المنتجات تضخيم لمنع المنتجات تضخيم من دخول المنطقة قبل تضخيم جنبا إلى جنب مع تدفق الهواء. ويمكن أن يتم ذلك في طريقة خفض ضغط الهواء من تخزين الكاشف ومنطقة إعداد → منطقة إعداد العينة → منطقة التضخيم → منطقة تحليل المنتج التضخيم. ويمكن تحقيق ذلك عن طريق تثبيت مراوح العادم، وأجهزة العادم الضغط السلبي أو أساليب أخرى مجدية.


3. دخول كل مجال عمل يجب أن تتبع بدقة اتجاه واحد، وهذا هو، تخزين الكاشف ومنطقة إعداد → منطقة إعداد العينة → منطقة التضخيم → منطقة تحليل المنتج التضخيم. يجب استخدام مناطق عمل مختلفة (مثل ألوان مختلفة). ولا يجوز للعمال أن يأخذوا ملابس العمل عند مغادرتهم كل منطقة عمل.


4. ينبغي أن يتم تنظيف المختبر في اتجاه تخزين الكاشف ومساحة إعداد→منطقة إعداد العينة→ منطقة التضخيم→ منطقة تحليل المنتج مكبرة. وينبغي أن يكون للمناطق التجريبية المختلفة أجهزة التنظيف الخاصة بها لمنع التلوث عبر.


5. بعد انتهاء العمل، يجب تنظيف منطقة العمل على الفور. يجب أن يكون سطح مقاعد البدلاء المختبرية في منطقة العمل قادرًا على تحمل آثار التطهير والتنظيف للمواد الكيميائية مثل هيبوكلوريت الصوديوم. وينبغي أن تكون الأشعة فوق البنفسجية على سطح مقاعد البدلاء المختبر مريحة وفعالة. وبما أن المسافة والطاقة من الأشعة فوق البنفسجية هي حاسمة جداً لتأثير إزالة التلوث، يمكن استخدام مصباح الأشعة فوق البنفسجية المنقولة (الطول الموجي 254nm)، وبعد الانتهاء من العمل، فإنه يمكن تعديلها لتشعيع داخل 60-90cm على طاولة تجريبية. وبما أن المنتج المضخم لا يمثل سوى بضع مئات أو عشرات من أزواج القاعدة (bp)، فإنه ليس حساسًا لضروب الأشعة فوق البنفسجية، لذا يجب أن يتم إشعاع جزء تضخيم الأشعة فوق البنفسجية لفترة أطول، ويفضل أن يكون بين عشية وضحاها.


4470e46a8191b41672af5226018ca72f



وظائف مخزن الكاشف و منطقة التحضير هي: إعداد الكواشف التخزينية، الاستغناء عن الكواشف، وإعداد خليط تفاعل التضخيم، فضلا عن تخزين وإعداد المواد الاستهلاكية مثل أنابيب وأجهزة الطرد المركزي. وينبغي نقل المواد مثل الكواشف التخزينية والمواد الاستهلاكية المستخدمة في إعداد العينات مباشرة إلى منطقة تخزين الكاشف وإعداده، ولا يمكن أن تمر عبر منطقة الكشف عن التضخيم. وينبغي ألا تخزن مواد التحكم الإيجابية ومواد مراقبة الجودة في المجموعة في هذا المجال، بل ينبغي تخزينها في هذا المجال. منطقة تجهيز العينات.


وظيفة منطقة إعداد العينة هي: الحمض النووي (RNA، الحمض النووي) استخراج وتخزين وإضافة إلى أنبوب تفاعل التضخيم. وينبغي تلبية متطلبات معدات الحماية والحماية الشخصية ومواصفات التشغيل للمختبرات الثانوية للسلامة الأحيائية بالنسبة للعمليات التي تشمل العينات السريرية. وبما أن التلوث بالأيروسولات قد يحدث أثناء خلط العينات وتنقية الحمض النووي، يمكن وضع ظروف ضغط إيجابية في هذه المنطقة لتجنب تلوث الهباء الجوي من المناطق المجاورة. لتجنب التلوث المتبادل بين العينات ، بعد إضافة الحمض النووي ليتم اختباره ، يجب تغطية أنبوب التفاعل الذي يحتوي على خليط التفاعل. بالنسبة للمواد المعدية المحتملة ، يجب فتح الغطاء في خزانة السلامة البيولوجية ، ويجب أن تكون هناك إجراءات واضحة للتعامل مع العينات والإي تعطيلها.


وظيفة منطقة التضخيم هي: تخليق الحمض النووي، تضخيم الحمض النووي والكشف. من أجل تجنب التلوث الناجم عن الهباء الجوي، يجب تقليل المشي في المنطقة. وتجدر الإشارة إلى أن جميع أنابيب التفاعل اختبار يجب عدم فتح في هذا المجال.


وظيفة مجال تحليل المنتج تضخيمها هو: مزيد من التحليل وتحديد شظايا تضخيم، مثل التهجين، الانزيم الهضم الكهربائي، denaturing تحليل السائل عالية الأداء، والتسلسل، الخ. منتجات تضخيم الحمض النووي لديها أساليب تحليل مختلفة، مثل أساليب التهجين التحقيق على الأغشية أو على microplates أو رقائق (وضع العلامات النويدة المشعة أو وضع العلامات النويدية غير المشعة)، مباشرة أو هضم agarose هلام electrophoresis، polyacrylamide هلام الكهرباء، نقل الجنوبية، وأساليب تسلسل الحمض النووي، وقياس الطيف الشامل، الخ.


مجال تحليل منتج التضخيم هو المصدر الرئيسي للتلوث المنتج التضخيم في مختبر PCR، لذلك ينبغي توخي الحذر لتجنب حمل المنتج التضخيم من خلال المواد وملابس العمل في هذا المجال. عند استخدام طريقة PCR-ELISA للكشف عن المنتجات المضخمة، يجب استخدام غسالة الصفائح لغسل الألواح، ويجب جمع سائل النفايات في 1 مول/لتر HCl، ولا يمكن سكبه في المختبر، ولكن يجب التخلص منه بعيدًا عن مختبر PCR. اسقاط. يجب أيضا أن تكون غارقة في طرف المستخدمة 1 مول / لتر HCl ومن ثم وضعها في كيس القمامة للتخلص منها وفقا للإجراءات، مثل الحرق. وبما أن هذا المجال قد يستخدم بعض الطفرات الجينية والمواد السامة مثل بروميد الإثيديوم، الأكريلاميد، الفورمالديهايد أو النويدات المشعة، وما إلى ذلك، ينبغي إيلاء الاهتمام لحماية سلامة المجربين.