الصفحة الرئيسية > أخبار > المحتوى

ما هو تصميم معمل PCR

Aug 03, 2020

جوهر تصميم مختبر PCR:


1 ، تخطيط مختبر PCR

ينقسم مختبر اختبار تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى ثلاث مناطق عمل منفصلة من حيث المبدأ: منطقة تخزين وتحضير الكاشف ، ومنطقة تحضير العينات ، ومنطقة تحليل التضخيم والتضخيم للمنتج. من أجل تجنب التلوث المتبادل ، يجب أن يتبع دخول كل منطقة عمل بدقة اتجاهًا واحدًا ، أي فقط من منطقة تخزين وتحضير الكاشف ← منطقة تحضير العينة ← منطقة تحليل التضخيم والتضخيم للمنتج. يجب أن يتم نقل الكواشف والعينات بين كل منطقة تجريبية من خلال نافذة النقل.



2. تصميم نظام تكييف الهواء والتهوية والتحكم في الضغط

لا يحتوي مختبر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على متطلبات صارمة لمستوى التنقية ، ولكن من أجل تجنب إمكانية التلوث المتبادل بين مختلف المناطق التجريبية ، فمن المستحسن اعتماد تسليم كامل وشكل تنظيم هواء العادم الكامل. في الوقت نفسه ، يجب التحكم بدقة في نسبة إمداد الهواء والعادم لضمان متطلبات الضغط لكل منطقة تجريبية.


微信图片_20200701162204

(1) منطقة تخزين وتحضير الكاشف

العمليات الرئيسية في هذه المنطقة التجريبية هي تحضير كواشف التخزين ، وصرف الكواشف وتحضير خليط التفاعل الرئيسي. يجب نقل الكواشف والمواد المستخدمة في تحضير العينة مباشرة إلى هذه المنطقة وليس عبر مناطق أخرى. يجب تخزين المواد الخام الكاشف في هذه المنطقة وتحضيرها في كواشف التخزين المطلوبة في هذه المنطقة. من أجل التحكم في ضغط تدفق الهواء ، يجب أن تحافظ هذه المنطقة على ضغط إيجابي طفيف في الخارج.



(2) منطقة تحضير العينة

العمليات الرئيسية في هذا المجال هي حفظ العينات ، واستخراج الحمض النووي (RNA ، DNA) وتخزينه وإضافته إلى أنبوب تفاعل التضخيم وقياس تخليق الحمض النووي. يجب أن يكون تدرج الضغط في هذه المنطقة ضغطًا إيجابيًا بالنسبة للمنطقة المجاورة لتجنب تلوث الهباء الجوي الذي يدخل المنطقة من المنطقة المجاورة. بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لأن التلوث الناجم عن الهباء الجوي قد يحدث أثناء عمليات تحميل العينة ، يجب تجنب المشي غير الضروري في هذه المنطقة.


(3) منطقة تحليل التضخيم والتضخيم المنتج

العمليات الرئيسية في هذا المجال هي تضخيم الحمض النووي وتحديد الشظايا المتضخمة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضًا إجراء إضافة قالب DNA المحضر (من منطقة تحضير العينة) وتحضير خليط التفاعل الرئيسي (من منطقة تخزين وتحضير الكاشف) في خليط التفاعل في هذه المنطقة. متطلبات تدرج الضغط في هذه المنطقة هي: الضغط السلبي بالنسبة للمنطقة المجاورة لتجنب تسرب الهباء الجوي من هذه المنطقة. لتجنب التلوث الناجم عن الهباء الجوي ، يجب التقليل من المشي غير الضروري في المنطقة. يجب إجراء العمليات الفردية مثل إضافة العينة في منضدة فائقة النظافة.


3. منع التلوث والسيطرة عليه


القضية الأساسية لتصميم مختبر PCR هي كيفية تجنب التلوث. في العمل الفعلي ، الأنواع التالية من التلوث شائعة: تلوث المنتجات المكبرة ؛ تلوث الحمض النووي الجيني الطبيعي ؛ تلوث الكواشف والتلوث بين العينات. لأنه بمجرد حدوث التلوث ، يجب إيقاف التجربة حتى يتم العثور على مصدر التلوث ، ويجب إبطال نتيجة التجربة وإعادة التجربة. لذلك ، فإن العثور على مصدر التلوث حول المختبر بعد حدوث التلوث ، وإهدار القوى العاملة والموارد المادية ، يستغرق وقتًا طويلاً ومملة. لذلك ، لتجنب التلوث ، يجب أن تكون الأولوية الأولى هي الوقاية وليس القضاء.


(1) التقسيم الصارم لمنطقة العمل

إعداد كل منطقة تجريبية معقول ؛ يجب أن تحتوي كل منطقة تجريبية على علامات واضحة (مثل رقم منزل لافت للنظر أو لون أرضي مختلف ، وما إلى ذلك) لتجنب الخلط بين المعدات والكواشف في مناطق تجريبية مختلفة.


(2) إعدادات النظام المعقولة

إعدادات نظام تكييف الهواء والتهوية المعقولة ، حاول استخدام أنظمة التوصيل الكامل وأنظمة تكييف الهواء العادم ؛ تحكم صارم في ضغط تدفق الهواء لضمان متطلبات الضغط المختلفة في مناطق التجارب المختلفة.


(3) التشغيل القياسي

يجب أن يخضع الفنيون في مختبر اختبار التضخيم للتدريب أثناء العمل ، وفقط بعد أن يصبحوا مؤهلين يمكنهم المشاركة في اختبار تضخيم الجينات السريري ؛ أثناء العملية التجريبية ، يجب على المشغل ارتداء القفازات وتغييرها بشكل متكرر. بالإضافة إلى ذلك ، فإن استخدام الأغطية التي تستخدم لمرة واحدة في العملية هو أيضًا إجراء فعال لمنع التلوث ؛ عمل التنظيف في الوقت المناسب وصحيح. بعد انتهاء العمل التجريبي ، يجب تنظيف المنطقة على الفور. بالإضافة إلى سائل التطهير التقليدي لمسح وتطهير السطح أو التعقيم بالأشعة فوق البنفسجية ، يجب أيضًا تعقيم بعض المعدات التجريبية.


(4) إدارة صارمة

تحكم بصرامة في دخول وخروج الأفراد من المختبر. لا يُسمح للموظفين الذين لا علاقة لهم بالتجربة بالدخول إلى المختبر ومغادرته متى شاءوا. إذا أمكن ، قم بإعداد ممرات وأبواب مستقلة للدخول والخروج من منطقة التجارب بأكملها ؛ تقليل المشي غير الضروري في منطقة التجربة لتقليل احتمالية انتقال التلوث ؛ منتجات التضخيم منطقة التحليل هي المصدر الرئيسي لتلوث المنتجات المضخمة. لا يمكن التخلص من نفايات السوائل في المختبر. يجب نقعها وتطهيرها في مطهر والتخلص منها بعيدًا عن المختبر. يجب أيضًا تطهير المواد التي يمكن التخلص منها مثل النصائح المستخدمة. بعد النقع والتطهير ، معاملة موحدة ، مثل الحرق ، وما إلى ذلك ؛ قد تستخدم منطقة تحليل منتج التضخيم بعض الطفرات الجينية والمواد السامة ، ويجب إيلاء اهتمام خاص لحماية سلامة أفراد التجربة.


(5) مرافق دعم مخبرية كاملة

مرافق دعم المختبر الكاملة ضرورية لضمان العمل التجريبي. يجب تجهيز المعدات والأدوات المتوافقة وفقًا للمحتويات التجريبية المختلفة لكل مختبر ، مثل المقاعد فائقة النظافة ، وأجهزة الطرد المركزي ، وأخذ العينات ، إلخ.